MPXV PCR Monkeypox Virus Gefriert getrocknete Multiplex Echtzeit-PCR-Erkennung

Verfahren für den Betrieb

1) Extraktion von Nukleinsäure Extrahieren Sie DNA aus Proben mit einem geeigneten Extraktions-Kit.Es wird empfohlen, die Nukleinsäure im letzten Extraktionsschritt mit etwa 100 μl Elutionspuffer (TE oder nukleasefreies H2O) zu elutieren.Die gereinigte Nukleinsäure sollte sofort verwendet oder bei -20°C aufbewahrt werden.

2) Vorbereitung der positiven Kontrollen Die positive Kontrollen können vor der Rehydratation bis zu 12 Monate bei Raumtemperatur gelagert werden.Vor Gebrauch sollte es durch Zugabe von 250 μl TE-Puffer oder nukleasefreiem H2O rehydriert werden., 15-20 Sekunden lang mit niedriger Drehzahl vorrunden und 15-20 Sekunden lang mit niedriger Drehzahl zentrifugieren.

3) Echtzeit-RT-PCR-Mischvorbereitung

A) Öffnen Sie die Vakuumverpackung und nehmen Sie die 8-Rohrstreifen mit dem Reagenzstoff heraus.Wenn die mitgelieferten Schläuche nicht mit Ihrem Instrument kompatibel sind, übertragen Sie die Reagenzpellets in ein mit Ihrem Gerät kompatibles optisches Rohr.

B) Öffnen Sie die Röhren und entsorgen Sie die Kappen (nicht für Echtzeit-PCR-Maschinen geeignet) und bereiten Sie die Reaktionsmischung wie folgt auf Eis vor

* Nucleasefreies Wasser kann als negative Kontrolle verwendet werden.

C) Versiegelung der Rohre mit optischen Kappen oder 96-Bohrplatte mit optischer Versiegelungsfolie (nicht geliefert).

D) Wirbeln Sie die Röhren mit geringer Geschwindigkeit für 10 bis 15 Sekunden und zentriformieren Sie sie bei 3000 Rpm für 20 Sekunden und legen Sie sie in ein Echtzeit-PCR-Instrument.

3) RT-PCR-Einstellung: Setzen Sie das Reaktionsvolumen auf 25μl und das PCR-Verstärkungsverfahren wie folgt.ROX (für Orf1ab) und CY5 (für das RNase-P-Gen) Fluoreszenz bei 60°C, und wählen Sie NONE als passive Referenz.
4) Ergebnisanalyse und Interpretation Die Schwellenlinie wird nach den Anweisungen des Geräts festgelegt.

A) Qualitätskontrolle:

B) Interpretation der Probenergebnisse

Technische Parameter: