Antiantikörper-Test-Ausrüstungen schilddrüsen-Peroxydase-Elisa Test Kit Antis TPO

Anti--TPO Antithyroid-Peroxydase Elisa Kit

1. Beabsichtigter Gebrauch

Immunoassay für die quantitative in-vitrobestimmung von Antikörpern zur Schilddrüsenperoxydase im menschlichen Serum. Die Anti-‐ TPO Bestimmung wird als Hilfe in der Diagnose von autoimmunen Schilddrüsenerkrankungen verwendet.

2. Zusammenfassung

• Schilddrüse ‐ spezifische Peroxydase (TPO) ist auf den Mikrosomen von thyrocytes anwesend und wird an seiner Spitzenzelloberfläche ausgedrückt. In der Synergie mit Thyroglobulin (Tg) hat dieses Enzym eine wesentliche Funktion im Iodination von L ‐ Tyrosin und die chemische Koppelung von vom resultierenden Mono-‐ und dem Iodotyrosine di ‐, zum der Schilddrüsenhormone T4, T3 und FT3 zu bilden.
• TPO ist ein mögliches autoantigen. Erhöhte Serumtiter von Antikörpern zu TPO werden in einigen Formen von Thyreoiditis verursacht durch Autoimmunität gefunden. Die Stille fand häufig, dass Ausdruck „mikrosomaler Antikörper“ von der Zeit entsteht, als TPO nicht noch als Antigen in der Autoimmunität identifiziert worden war, die durch Mikrosomen verursacht wurde. In der klinischen Richtung können das zwei Ausdrücke Anti-‐ TPO und der mikrosomale Antikörper synonym benutzt werden; es gibt Unterschiede jedoch hinsichtlich der Prüfmethoden.
• Hohe Anti-‐ TPO Titer werden in bis 90% von Patienten mit chronischen Hashimotos Thyreoiditis gefunden. Im Morbus Basedow haben 70% der Patienten einen erhöhten Titer. Obgleich die Empfindlichkeit des Verfahrens erhöht werden kann, durch anderen Schilddrüsenantikörper (Anti-‐ Tg gleichzeitig bestimmen, TSH-‐ Empfänger ‐ Antikörper - TRAb), streicht ein negatives Finden nicht die Möglichkeit einer Autoimmunerkrankung durch. Die Größe des Antikörpertiters bezieht nicht mit der klinischen Tätigkeit der Krankheit aufeinander. Zuerst können erhöhte Titer nach langatmigen Zeiträumen der Krankheit oder während des Erlassses negativ werden. Wenn Antikörper folgender Erlass wieder erscheinen, dann ist ein Rückfall wahrscheinlich.
• Während die üblichen mikrosomalen Antikörpertests ungereinigte Mikrosomen als Antigenvorbereitung einsetzen, benutzen die Anti-‐ TPO Tests eine gereinigte Peroxydase. Die zwei Verfahren sind von der vergleichbaren Leistung im Hinblick auf klinische Empfindlichkeit, aber besseres Los ‐ zur ‐ Losübereinstimmung und zur höheren klinischen Besonderheit kann vom Anti-‐ TPO erwartet werden prüft passendes zum hochwertigeren des Antigens verwendete. Das Enzym verband Immunosorbentproben benutzt menschliche Antigen und Kaninchen anti-menschliche IgG-Antikörper (anti--IgG).

3. Messgrundlage

Indirekte Methode, Gesamtdauer der Probe: 70 Minuten.

Das anti--TPO ELISA setzt festen Aggregatzustand, indirekte ELISA-Nachweismethode von Antikörpern zu TPO im zweistufigen Ausbrütungsverfahren ein. Polystyren microwell Streifen sind mit in hohem Grade immunoreactive menschlichen TPO-Antigenen vorbeschichtet. Während des ersten Ausbrütungsschrittes werden anti--TPO spezifische Antikörper, wenn anwesend, zum festen Aggregatzustand vorgalvanisierten TPO-Antigene gesprungen. Die Brunnen werden gewaschen, um ungebundene Serumproteine zu entfernen, und Kaninchen werden anti-menschliche IgG-Antikörper (anti--IgG) konjugiert zur Enzymmeerrettichperoxydase (HRP- Paronym) addiert. Während des zweiten Ausbrütungsschrittes werden diese HRP-konjugierten Antikörper zu allen möglichen Komplexen des Antigenantikörpers (IgG) sich bildeten vorher gesprungen und das ungebundene HRP-Paronym wird dann durch das Waschen entfernt. Die Chromogenlösungen, die Tetramethylbenzidine (TMB) enthalten und Harnstoffhyperoxyd werden den Brunnen hinzugefügt und im Vorhandensein des Antigen-Antikörper-Anti-IgG immunocomplex (HRP), werden die farblosen Chromogene durch das verklemmte HRP-Paronym zu einem blau-farbigen Produkt hydrolysiert. Die blaue Farbe dreht sich gelb, nachdem sie die Reaktion mit Schwefelsäure gestoppt hat.

Die Menge von Farbintensität kann gemessen werden und sie ist zur Menge des Antikörpers gefangen genommen in den Brunnen und zur Menge des Antikörpers in der Probe beziehungsweise proportional.

4. Reagens-Materialien stellten zur Verfügung

• Beschichteter Microplate, 8 X12 Streifen, 96 Brunnen. Vorgalvanisiert mit menschlichem TPO-Antigen.

• Kalibrierer, 6 Phiolen, 1 ml jedes, gebrauchsfertig; Konzentrationen: 0 (A), 25 (B), 50 (C), 100 (D), 250 (E) und 500 (F) IU/mL.

• Enzym-Paronym, 1 Phiole, 11,0 ml HRP (Meerrettichperoxydase) beschriftete Kaninchen anti- menschliche IgG-Antikörper (anti--IgG) im Puffer Tris-NaCl, der BSA enthält (Rinderserumalbumin). Enthält 0,1% Konservierungsmittel ProClin300.

• Serum-Verdünnungsmittel: 1 Phiole, 11mL. Enthalten von Puffersalzen und von Färbung

• Wäsche-Lösungs-Konzentrat, 1 Phiole, 25 ml (40X konzentrierte sich), PBS-Tweenwäschelösung.

• Substrat, 1 Phiole, 11ml, gebrauchsfertig, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Stoppen Sie Lösung, 1 Phiole, 6,0 ml von 1 mol/l Schwefelsäure.

• IFU, 1 Kopie.

• Platten-Deckel: 2 Stücke.

Materialien erfordert (aber nicht zur Verfügung gestellt)

• Microplate-Leser mit saugfähiger Fähigkeit der Wellenlänge 450nm und 620nm.

• Microplate-Waschmaschine.

• Brutkasten.

• Plattenschüttel-apparat.

• Mikropipetten und Mehrkanalmikropipetten, die 50µl mit einer Präzision von besser als 1,5% liefern.

• Saugfähiges Papier.

• Destilliertes Wasser

5. Testverfahren

• Verwenden Sie nur die Anzahl von den erforderten Brunnen und formatieren Sie die microplate Brunnen, damit jeden Kalibrierer und Probe geprüft werden kann.

• Fügen Sie µL 100 von Kalibrierern jedem Brunnen hinzu.

• Fügen Sie µL 100 des Beispielverdünnungsmittels (grüne Farbe) jedem Brunnen ausgenommen die Kalibrierer-Brunnen hinzu.

• Fügen Sie µL 10 der Probe jedem Beispielverdünnungsmittelbrunnen hinzu (ANMERKUNG: Reagenzien in Wells drehen blaue Farbe vom Grün), dann rütteln 30 Sekunden.

• Bedecken Sie die Platte mit einem Plattendeckel und brüten Sie bei °C 37 für 30 Minuten aus.

• Werfen Sie den Inhalt der Mikroplatte durch Abschlämmung oder Aspiration weg. Beim Abfüllen, klopfen Sie und beflecken Sie das Plattentrockene mit saugfähigem Papier.

• Fügen Sie µL 350 der Wäschelösung hinzu, füllen Sie ab (Hahn und Fleck) oder saugen Sie an. Wiederholen Sie 4 zusätzliche Mal für insgesamt 5 Wäschen. Am Ende der Reinigung, wandeln Sie die Platte um und klopfen Sie heraus jede Restwäschelösung auf saugfähiges Papier.

• Fügen Sie µL 100 des Enzymparonyms hinzu,

• Bedecken Sie die Platte mit einem Plattendeckel und brüten Sie bei °C 37 für 30 Minuten aus.

• Fügen Sie µL 350 der Wäschelösung hinzu, füllen Sie ab (Hahn und Fleck) oder saugen Sie an. Wiederholen Sie 4 zusätzliche Mal für insgesamt 5 Wäschen. Am Ende der Reinigung, wandeln Sie die Platte um und klopfen Sie heraus jede Restwäschelösung auf saugfähiges Papier.

• Fügen Sie µL 100 des Substrates jedem Brunnen hinzu. Bedecken Sie und brüten Sie bei Raumtemperatur (18-25℃) in der Dunkelheit für Reaktion für 10 Minuten aus. Rütteln Sie die Platte nicht nach Teilstaatzusatz.

• Fügen Sie µL 50 der Endlösung jedem Brunnen hinzu.

• Rütteln Sie, damit 15-20 Sekunden die Flüssigkeit innerhalb der Brunnen mischen. Es ist wichtig, zu garantieren dass die blauen Farbänderungen, zum sich vollständig gelb zu färben.

• Lesen Sie die Absorption jedes Brunnens bei 450 Nanometer (unter Verwendung 620 bis 630 Nanometer als die Referenzwellenlänge, zum von wohlen Unvollkommenheiten herabzusetzen) in einem Mikroplattenleser. Die Ergebnisse sollten innerhalb 30 Minuten des Hinzufügens gelesen werden stoppen Lösung.