VCAM-1 RUO Elisa Kit Menschliche vaskuläre Endothelzelladhäsionsmoleküle 1

Beschreibung des Produkts:

Zweck

Dieses Kit ermöglicht die Bestimmung von VCAM-1-Konzentrationen im Humanserum, Zellkultur-Supernaten und anderen biologischen Flüssigkeiten.

Prinzip des Tests

Das Kit untersucht den menschlichen VCAM-1-Spiegel in der Probe, verwendet den reinigten menschlichen VCAM-1-Antikörper, um die Mikrotiterplatten zu beschichten, macht einen Festphasen-Antikörper und fügt dann VCAM-1 zu den Brunnen hinzu,Kombinierter VCAM-1-Antikörper mit HRP-Kennzeichnung, werden Antikörper-Antigen-Enzym-Antikörper-Komplex, nach dem Waschen vollständig, Hinzufügen TMB Substratlösung, TMB Substrat wird blau bei HRP enzymkatalysiert,Die Reaktion wird durch Zugabe einer Schwefelsäure-Lösung beendet und die Farbveränderung wird spektrophotometrisch mit einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.Die Konzentration von Human VCAM-1 in den Proben wird dann durch Vergleich der O.D. der Proben mit der Standardkurve bestimmt.

Material, das mit dem Kit geliefert wird

Technische Parameter:

Musteranforderungen

• Die Proben sollten so bald wie möglich nach der Sammlung und gemäß der einschlägigen Literatur extrahiert und so bald wie möglich nach der Extraktion experimentiert werden.Das Exemplar kann bei -20 °C aufbewahrt werden, umVermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tonzyklen.
• Die Proben, die NaN3 enthalten, können nicht nachgewiesen werden, da NaN3 die HRP-Aktivität hemmt.

Prüfverfahren

• Verdünnen und Probe hinzufügen: Verdünnen Ursprungsdichte Norm wie in der folgenden Tabelle:

2. Probe hinzufügen: Die leeren Probengrube separat einstellen (in leeren Vergleichsbrunnen wird keine Probe und HRP-Konjugat-Reagenz hinzugefügt, sonst ist jeder Schritt derselbe).50 μl Standard auf Microelisa-Stripplatte zugeben, die Probenverwässerung 40 μl in die Probenbrunn hinzufügen, dann die Probenverwässerung 10 μl hinzufügen (die endgültige Probenverwässerung beträgt 5-fache), die Proben in die Brunnen hinzufügen, die Brunnenwand so weit wie möglich nicht berühren und vorsichtig mischen.

3.Inkubation: Nach dem Verschluss der Platte mit der Verschlussplattenmembran 30 min bei 37°C inkubieren.

4. Flüssigkeit konfigurieren: 30- (oder 20-fache) Waschlösung, 30- (oder 20-fache) mit destilliertem Wasser und Reserve verdünnt.

5. Waschen: Entdecken Sie die Schließplattenmembran, entsorgen Sie die Flüssigkeit, trocknen Sie sie mit einem Schwung, fügen Sie Waschpuffer zu jedem Brunnen hinzu, halten Sie 30 Minuten, dann entleeren Sie, wiederholen Sie 5 Mal, trocknen Sie mit einem Schlag.

6Zusatz von Enzymen: Zusatz von HRP-Konjugat-Reagenz 50 μl in jede Brunnenstelle, ausgenommen leere Brunnenstelle.

7Inkubation: Operation mit 3.

8- Waschen: Operation mit 5.

9. Farbe: Zugabe der Chromogenlösung A 50ul und der Chromogenlösung B 50ul zu jedem Brunnen, Vermeidung der Lichtkonservierung für 10 Minuten bei 37°C

10. Stoppen der Reaktion: Fügen Sie Stop-Lösung50μl zu jedem Brunnen hinzu, Stoppen der Reaktion ((die blaue Farbe verändert sich in gelbe Farbe).

11. Beurteilung: Holen Sie sich einen leeren Brunnen als Null, lesen Sie die Absorptionsrate bei 450 nm nach dem Hinzufügen der Stopplösung und innerhalb von 15 min

Berechnen:

Nehmen wir die Standarddichte als die horizontale, den OD-Wert für die vertikale, zeichnen wir die Standardkurve auf Grafikpapier,Finden Sie die entsprechende Dichte nach dem OD-Wert der Stichprobe durch die Stichprobenkurve, multipliziert mit dem Verdünnungsmultiplikator oder berechnet die gerade Regressionsgleichung der Standardkurve mit der Standarddichte und dem OD-Wert,mit dem Stichproben-OD-Wert in der Gleichung,Berechnung der Probendichte, multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor, ergibt sich die tatsächliche Probendichte.