Humaner TLR4 RUO ELISA Testkit zur medizinischen Diagnose RUO Nur für Forschungszwecke

Zweck:

Dieses Kit ermöglicht die Bestimmung von TLR4-Konzentrationen im menschlichen Serum.

Prinzip des Tests

Das Kit untersucht den menschlichen TLR4-Spiegel in der Probe, verwendet den gereinigten menschlichen TLR4-Antikörper, um die Mikrotiterplatten zu beschichten, stellt festphasige Antikörper her und fügt dann TLR4 zu den Brunnen hinzu,Kombinierter TLR4-Antikörper mit HRP-Kennzeichnung, werden Antikörper-Antigen-Enzym-Antikörper-Komplex, nach dem Waschen vollständig, Hinzufügen TMB Substratlösung, TMB Substrat wird blau bei HRP enzymkatalysiert,Die Reaktion wird durch Zugabe einer Schwefelsäure-Lösung beendet und die Farbveränderung wird spektrophotometrisch mit einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.Die Konzentration von Human TLR4 in den Proben wird dann durch Vergleich der O.D. der Proben mit der Standardkurve bestimmt.

Technische Parameter:

Material, das mit dem Kit geliefert wird:

Musteranforderungen

• Die Proben sollten so bald wie möglich nach der Sammlung und gemäß der einschlägigen Literatur extrahiert und so bald wie möglich nach der Extraktion experimentiert werden.Das Exemplar kann bei -20 °C aufbewahrt werden, umVermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tonzyklen.
• Die Proben, die NaN3 enthalten, können nicht nachgewiesen werden, da NaN3 die HRP-Aktivität hemmt.

Prüfverfahren

• Verdünnen und Probe hinzufügen: Verdünnen Ursprungsdichte Norm wie in der folgenden Tabelle:

2. Probe hinzufügen:Leere Probengrube separat einstellen (Leere Vergleichsbrunnen fügen keine Probe und HRP-Konjugat-Reagenz hinzu, sonst ist jeder Schritt derselbe).50 μl Standard auf Microelisa-Stripplatte zugeben, die Probenverwässerung 40 μl in die Probenbrunn hinzufügen, dann die Probenverwässerung 10 μl hinzufügen (die endgültige Probenverwässerung beträgt 5-fache), die Proben in die Brunnen hinzufügen, die Brunnenwand so weit wie möglich nicht berühren und vorsichtig mischen.

3Inkubation: Nach dem Verschluss der Platte mit der Schließplattenmembran 30 min bei 37°C inkubation.

4. Flüssigkeit konfigurieren: 30- (oder 20-fache) Waschlösung, 30- (oder 20-fache) mit destilliertem Wasser und Reserve verdünnt.

5. Waschen: Entdecken Sie die Schließplattenmembran, entsorgen Sie die Flüssigkeit, trocknen Sie sie mit einem Schwung, fügen Sie Waschpuffer zu jedem Brunnen hinzu, halten Sie 30 Minuten, dann entleeren Sie, wiederholen Sie 5 Mal, trocknen Sie mit einem Schlag.

6.Enzym hinzufügen: HRP-Conjugate-Reagenz 50 μl in jede Brunnenstelle, ausgenommen leere Brunnenstelle, hinzufügen.

7Inkubation: Operation mit 3.

8- Waschen: Operation mit 5.

9.Farbe: Zugabe der Chromogenlösung A 50ul und der Chromogenlösung B 50ul zu jedem Brunnen, Vermeidung der Lichtkonservierung für 10 min bei 37°C

10.Stoppen der Reaktion:Geben Sie jeder Brunne Stop-Lösung50μl hinzu, Stoppen Sie die Reaktion ((die blaue Farbe verändert sich in gelbe Farbe).

11.Analyse: Holen Sie sich einen leeren Brunnen bei Null, lesen Sie die Absorptionsrate bei 450 nm nach Zugabe der Stopplösung und innerhalb von 15 min.

Berechnen

Nehmen wir die Standarddichte als die horizontale, den OD-Wert für die vertikale, zeichnen wir die Standardkurve auf Grafikpapier,Finden Sie die entsprechende Dichte nach dem OD-Wert der Stichprobe durch die Stichprobenkurve, multipliziert mit dem Verdünnungsmultiplikator oder berechnet die gerade Regressionsgleichung der Standardkurve mit der Standarddichte und dem OD-Wert,mit dem Stichproben-OD-Wert in der Gleichung,Berechnung der Probendichte, multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor, ergibt sich die tatsächliche Probendichte.