BIOVANTIONS-Antithyroglobulin-Antikörper-Test Antitest-Ausrüstung tg AB

TEST KIT Thyroglobulin Ab Anti-Tg ELISA

1. Beabsichtigter Gebrauch

Immunoassay für die quantitative in-vitrobestimmung von Antikörpern zum Thyroglobulin im menschlichen Serum. Die Anti-‐ Tg-Bestimmung wird als Hilfe in der Entdeckung von autoimmunen Schilddrüsenerkrankungen verwendet.

2. Zusammenfassung

Thyroglobulin (Tg) wird in der Schilddrüse produziert und ist eine Hauptkomponente im Lumen des Schilddrüsenfollikels. In der Synergie mit der Enzymschilddrüse ‐ spezifischen Peroxydase (TPO), hat Tg eine wesentliche Funktion im Iodination von L ‐ Tyrosin und in der Bildung der Schilddrüsenhormone T4 und T3. sind Tg und TPO möglicherweise autoantigenic.

Erhöhte Serumkonzentrationen von Antikörpern gegen Tg (Tg-‐ Autoantibodies) werden in den Themen mit Autoimmunität ‐ basierten Thyreoiditis gefunden. Hohe Konzentrationen von Anti- ‐ Tg zusammen mit Anti-‐ TPO sind von chronisches lymphozytisches ‐ infiltrierender Thyreoiditis hinweisend (Hashimotos Krankheit). Die Frequenz von Thyroglobulinantikörpern ist ungefähr 70 ‐ 80% in den Themen mit autoimmuner ‐ Thyreoiditis, einschließlich Hashimotos Krankheit und ungefähr 30% in den Einzelpersonen mit Morbus Basedow. Die Anti- ‐ Tg-Probe ist für Gebrauch wichtig, wenn man den Kurs von Hashimotos Thyreoiditis überwacht und für die Differentialdiagnose (Fälle vermuteter autoimmuner Thyreoiditis des unbekannten Ursprungs mit negativen Anti-‐ TPO Testergebnissen, Morbus Basedow ohne lymphozytische Infiltration und Störung durch Tg-‐ Autoantibodies im Tg-Test durchstreichen).

Obgleich die Empfindlichkeit des Verfahrens erhöht werden kann, durch zusätzlichen Schilddrüsenantikörper (Anti-‐ TPO gleichzeitig bestimmen, TSH-‐ Empfänger ‐ Antikörper), streicht ein negatives Ergebnis nicht endgültig das Vorhandensein einer Autoimmunerkrankung durch. Das Niveau des Antikörpertiters bezieht nicht mit der klinischen Tätigkeit der Krankheit aufeinander. Titer, die zuerst erhöht werden, können negativ werden, wenn die Krankheit während eines längeren Zeitabschnitts weiter besteht, oder wenn

Erlass tritt auf. Wenn Antikörper nach Erlass wieder erscheinen, ist ein Rückfall wahrscheinlich.

Das Enzym verband Immunosorbentproben benutzt menschliche Antigen und Kaninchen antihuman IgG-Antikörper (anti--IgG).

Materialien 3.Reagents stellten zur Verfügung

• Beschichteter Microplate, 8 X12 Streifen, 96 Brunnen. Vorgalvanisiert mit menschlichem TG-Antigen.

• Kalibrierer, 6 Phiolen, 1 ml jedes, gebrauchsfertig; Konzentrationen: 0 (A), 50 (B), 150 (C), 500 (D), 1000 (E) und 2000 (F) IU/mL.

• Enzym-Paronym, 1 Phiole, 11,0 ml HRP (Meerrettichperoxydase) beschriftete Kaninchen anti- menschliche IgG-Antikörper (anti--IgG) im Puffer Tris-NaCl, der BSA enthält (Rinderserumalbumin). Enthält 0,1% Konservierungsmittel ProClin300.

• Serum-Verdünnungsmittel: 1 Phiole, 11mL. Enthalten von Puffersalzen und von Färbung

• Wäsche-Lösungs-Konzentrat, 1 Phiole, 25 ml (40X konzentrierte sich), PBS-Tweenwäschelösung.

• Substrat, 1 Phiole, 11ml, gebrauchsfertig, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Stoppen Sie Lösung, 1 Phiole, 6,0 ml von 1 mol/l Schwefelsäure.

• IFU, 1 Kopie.

• Platten-Deckel: 2 Stücke.

4. Materialien erfordert (aber nicht zur Verfügung gestellt)

• Microplate-Leser mit saugfähiger Fähigkeit der Wellenlänge 450nm und 620nm.
• Microplate-Waschmaschine.
• Brutkasten.
• Plattenschüttel-apparat.
• Mikropipetten und Mehrkanalmikropipetten, die 50µl mit einer Präzision von besser als 1,5% liefern.
• Saugfähiges Papier.
• Destilliertes Wasser

5. Testverfahren

• Verwenden Sie nur die Anzahl von den erforderten Brunnen und formatieren Sie die microplate Brunnen, damit jeden Kalibrierer und Probe geprüft werden kann.

• Fügen Sie µL 100 von Kalibrierern jedem Brunnen hinzu.

• Fügen Sie µL 100 des Beispielverdünnungsmittels (grüne Farbe) jedem Brunnen ausgenommen die Kalibrierer-Brunnen hinzu.

• Fügen Sie µL 10 der Probe jedem Beispielverdünnungsmittelbrunnen hinzu (ANMERKUNG: Reagenzien in Wells drehen blaue Farbe vom Grün), dann rütteln 30 Sekunden.

• Bedecken Sie die Platte mit einem Plattendeckel und brüten Sie bei °C 37 für 30 Minuten aus.

• Werfen Sie den Inhalt der Mikroplatte durch Abschlämmung oder Aspiration weg. Beim Abfüllen, klopfen Sie und beflecken Sie das Plattentrockene mit saugfähigem Papier.

• Fügen Sie µL 350 der Wäschelösung hinzu, füllen Sie ab (Hahn und Fleck) oder saugen Sie an. Wiederholen Sie 4 zusätzliche Mal für insgesamt 5 Wäschen. Am Ende der Reinigung, wandeln Sie die Platte um und klopfen Sie heraus jede Restwäschelösung auf saugfähiges Papier.

• Fügen Sie µL 100 des Enzymparonyms hinzu,

• Bedecken Sie die Platte mit einem Plattendeckel und brüten Sie bei °C 37 für 30 Minuten aus

• Fügen Sie µL 350 der Wäschelösung hinzu, füllen Sie ab (Hahn und Fleck) oder saugen Sie an. Wiederholen Sie 4 zusätzliche Mal für insgesamt 5 Wäschen. Am Ende der Reinigung, wandeln Sie die Platte um und klopfen Sie heraus jede Restwäschelösung auf saugfähiges Papier.

• Fügen Sie µL 100 des Substrates jedem Brunnen hinzu. Bedecken Sie und brüten Sie bei Raumtemperatur (18-25℃) in der Dunkelheit für Reaktion für 10 Minuten aus. Rütteln Sie die Platte nicht nach Teilstaatzusatz.

• Fügen Sie µL 50 der Endlösung jedem Brunnen hinzu.

• Rütteln Sie, damit 15-20 Sekunden die Flüssigkeit innerhalb der Brunnen mischen. Es ist wichtig, zu garantieren dass die blauen Farbänderungen, zum sich vollständig gelb zu färben.

• Lesen Sie die Absorption jedes Brunnens bei 450 Nanometer (unter Verwendung 620 bis 630 Nanometer als die Referenzwellenlänge, zum von wohlen Unvollkommenheiten herabzusetzen) in einem Mikroplattenleser. Die Ergebnisse sollten innerhalb 30 Minuten des Hinzufügens gelesen werden stoppen Lösung.