Anti-HCV-Elisa-Testkit mit hoher Spezifität für 96 Tests und 1,5-3 Stunden Testdauer

Der Anti-HCV-Assay ist ein Enzym-Linked-Immunosorbent-Assay (ELISA) zur qualitativen Bestimmung des HCV-Virus in menschlichem Serum und Plasma.

Das Hepatitis-C-Virus ist weltweit die häufigste Ursache für posttransfusionelle und community-erworbene Non-A-, Non-B-Hepatitis. Eine Infektion mit HCV führt häufig zu chronischer Hepatitis und Zirrhose und ist mit der Entwicklung eines hepatozellulären Karzinoms assoziiert. Das Hepatitis-C-Virus ist ein behülltes, einzelsträngiges RNA-Virus mit positivem Sinn, das als eigene Gattung in der Familie der Flaviviridae klassifiziert wurde. Das Genom besteht aus etwa 9,5 kb, die für ein 3000 Aminosäuren langes Polypeptid aus strukturellen und nicht-strukturellen Domänen kodieren. Wie andere RNA-Viren weist das HCV-Genom erhebliche Heterogenität als Folge von Mutationen auf, die während der viralen Replikation auftreten. Weltweit wurden mindestens 11 genetisch unterschiedliche Genotypen und mehrere Subtypen und Virusvarianten beschrieben. Eine Infektion mit bestimmten Genotypen kann den Schweregrad der Erkrankung und das Ansprechen auf die Behandlung beeinflussen. Hepatitis C wird hauptsächlich durch kontaminiertes Blut und Blutprodukte und in geringerem Umfang durch menschliche Körpersekrete übertragen.

Indirekte Methode. Gesamtdauer des Assays: 100 Minuten

Der Anti-HCV-ELISA verwendet eine Festphasen-, indirekte ELISA-Methode zum Nachweis von Antikörpern gegen HCV in einem zweistufigen Inkubationsverfahren. Polystyrol-Mikrowell-Streifen sind mit rekombinanten, hochimmunreaktiven Antigenen vorbeschichtet, die den Core- und den nicht-strukturellen Regionen von HCV (NS3, NS4 und NS5) entsprechen und alle HCV-Genotypen nachweisen können. Während des ersten Inkubationsschritts binden Anti-HCV-spezifische Antikörper, falls vorhanden, an die Festphase mit den vorbeschichteten HCV-Antigenen. Die Wells werden gewaschen, um ungebundene Serumproteine zu entfernen, und Maus-Anti-Human-IgG-Antikörper (Anti-IgG), konjugiert mit dem Enzym Meerrettichperoxidase (HRP-Konjugat), werden hinzugefügt. Während des zweiten Inkubationsschritts binden diese HRP-konjugierten Antikörper an alle zuvor gebildeten Antigen-Antikörper(IgG)-Komplexe, und das ungebundene HRP-Konjugat wird dann durch Waschen entfernt. Chromogenlösungen, die Tetramethylbenzidin (TMB) und Harnstoffperoxid enthalten, werden zu den Wells gegeben, und in Gegenwart des Antigen-Antikörper-Anti-IgG(HRP)-Immunkomplexes werden die farblosen Chromogene durch das gebundene HRP-Konjugat zu einem blau gefärbten Produkt hydrolysiert. Die blaue Farbe wird nach dem Stoppen der Reaktion mit Schwefelsäure gelb. Die Intensität der Farbe kann gemessen werden und ist proportional zur Menge des in den Wells gebundenen Antikörpers und zur Menge des Antikörpers in der Probe. Wells, die Proben enthalten, die negativ auf Anti-HCV sind, bleiben farblos.