1.Berechnen Sie die gewünschte Anzahl von Mikrowellen.
wiederverschließbare Plastiktüte, versiegelt und bei 2-8°C für spätere Verwendung aufbewahrt.
2.Kalibratoren und Proben hinzufügen:
2.1 Leerer Brunnen: Reagenzien dürfen nicht zugesetzt werden.
2.2 Kalibratorbohrungen: 100 μL Kalibratoren in die vorgesehenen Steuerbohrungen.
2.3 Versuchsbrunnen: Fügen Sie den Versuchsbrunnen 100 uL Probenverdünnungsmittel hinzu und fügen Sie anschließend 10 uL Proben in die entsprechende Brunnen.
2.4 Schütteln Sie die Platte 20 Sekunden lang sanft und bedecken Sie die Platte dann mit dem Versiegelungsmittel.
3Inkubation: Die Platte wird 30 Minuten lang bei 37°C inkubatiert.
4. Waschschritt (kann manuell oder mit automatischem Waschen durchgeführt werden):
Handwaschen: Entfernen Sie die Inkubationsmischung sorgfältig, indem Sie die Lösung in einen Abfallbehälter werfen.
mit 350 μL verdünntem Waschpuffer gut geschüttelt und 20-30 Sekunden lang sanft geschüttelt.
Nach Abschluss des letzten Waschvorgangs klopfen Sie auf das Absorptionspapier, um die verbleibende Flüssigkeit zu entfernen.
Automatisches Waschen: Der automatische Tellerspüler muss kalibriert sein, um eine effiziente Wäsche zu gewährleisten.
Abwaschpulver verdünnt und 20-30 Sekunden lang eingeweicht, alle Brunnen vollständig angesaugt, 4 weitere Male wiederholt.
5Konjugat: 100 μL Konjugat wird in jede Bohrstelle mit Ausnahme der leeren Bohrstelle gegeben.
6Inkubation: Die Brunnen bedecken und bei 37°C 30 Minuten inkubatieren.
7Waschschritt: Waschen Sie die Platte 5 Mal wie in Schritt 4 beschrieben.
8Substrat: 50 μL Substrat A und 50 μL Substrat B werden in jeden Brunnen, einschließlich des leeren Brunnen, gegeben.
Mikrowellen für 20 Sekunden, bei 37°C im Dunkeln für 15 Minuten.
9. Stop-Lösung: Fügen Sie 50 μL Stop-Lösung zu jeder Quelle hinzu. In Brunnen mit positiven Proben sollte sich eine gelbe Farbe entwickeln.
10. Lesen der Ergebnisse: Lesen bei 450/630-700 nm innerhalb von 30 Minuten.
1Anmerkung: Mikroplatte kann auch bei 450 nm abgelesen werden, es wird jedoch dringend empfohlen, sie bei 450/630-700 nm für
bessere Ergebnisse.
Chronometrie: Lesen Sie die optische Dichte (OD) der Probe bei 450 nm mit einem Mikroplattenleser.
Der mittlere OD-Wert der negativen Kontrollen ≤ 0,1 und der mittlere OD-Wert der positiven Kontrollen ≥ 0.8, ist die Prüfung gültig,
Ansonsten ist der Test ungültig.
Abschnittswert (CO) = Der mittlere OD-Wert der Negativkontrolle x 3 (berechnet durch 0,10 wenn der mittlere
Der OD-Wert der negativen Kontrollen beträgt < 0.10, berechnet anhand des tatsächlichen Wertes, wenn die mittlere negative Kontrolle OD
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