1.Berechnen Sie die gewünschte Anzahl von Mikrowellen. Entfernen Sie die restlichen Mikrowellen und legen Sie sie mit Trockenmittel in die
wiederverschließbare Plastiktüte, verschließen Sie sie und lagern Sie sie bei 2-8 °C für die spätere Verwendung.
2.Zugabe von Kalibratoren und Proben:
2. 1 Blindvertiefung: Keine Reagenzien zugeben.
2. 2 Kalibratorvertiefungen: 100 µL Kalibratoren in die vorgesehenen Kontrollvertiefungen geben.
2.3 Testvertiefungen: 100 uL Probenverdünner zu den Testvertiefungen geben, dann 10 uL Probe in die entsprechende Vertiefung geben.
2.4 Die Platte vorsichtig 20 Sekunden lang schütteln und dann die Platte mit dem Siegel abdecken.
3. Inkubation: Die Platte 30 Minuten bei 37 °C inkubieren.
4. Waschschritt (Kann manuell oder mit automatischem Wascher durchgeführt werden):
Manuelles Waschen: Die Inkubationsmischung vorsichtig entfernen, indem die Lösung in einen Abfallbehälter entsorgt wird. Jede
Vertiefung mit 350 µL verdünntem Waschpuffer füllen und 20-30 Sekunden lang vorsichtig schütteln. Die Waschflüssigkeit vollständig verwerfen. 4
weitere Male wiederholen. Nach Abschluss des letzten Waschschritts die Platte auf saugfähiges Papier klopfen, um Restflüssigkeit zu entfernen.
Automatisches Waschen: Ein automatischer Plattenwäscher muss kalibriert werden, um ein effizientes Waschen zu gewährleisten. Jede Vertiefung mit 350 µL
verdünntem Waschpuffer füllen und 20-30 Sekunden einwirken lassen. Alle Vertiefungen vollständig absaugen. 4 weitere Male wiederholen.
5. Konjugat: 100 μL Konjugat in jede Vertiefung geben, außer in die Blindvertiefung.
6. Inkubation: Die Vertiefungen abdecken und 30 Minuten bei 37 °C inkubieren.
7. Waschschritt: Die Platte 5 Mal wie in Schritt 4 beschrieben waschen.
8. Substrat: 50 µL Substrat A und 50 µL Substrat B in jede Vertiefung geben, einschließlich der Blindvertiefung. Die
Mikrowellen 20 Sekunden lang vorsichtig schütteln. 15 Minuten bei 37 °C im Dunkeln inkubieren.
9. Stopplösung: 50 µL Stopplösung zu jeder Vertiefung geben. In Vertiefungen mit positiven Proben sollte sich eine gelbe Farbe entwickeln.
10. Ergebnisse ablesen: Innerhalb von 30 Minuten bei 450/630-700 nm ablesen.
1. Hinweis: Die Mikrotiterplatte kann auch bei 450 nm gelesen werden, es wird jedoch dringend empfohlen, sie bei 450/630-700 nm zu lesen, um
bessere Ergebnisse zu erzielen.
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